> e to moze byc wina wlasnie TFA
> obecengo w fazie mobilnej bo on moze zatykac kolumne,
TFA dodaje sie podobno po to, Ĺźeby wyostrzaĹ piki (w peptydach to taki
standard). Zreszta jego w fazie ruchomej jest uĹamek procenta i nic nie
zatyka. My tez uzywamy takiej fazy do HPLC i nie mamy problemu. Co innego
jesli ma to dalej isc na MS (np. LCMS), to wtedy TFA przeszkadza w jonizacji
i zamiast uzywa sie kwasu mrĂłwkowego lub octowego.
Problemem moze byc plukanie 100% woda. Nie kazda kolumna nadaje sie do takiego
plukania. Zachodzi wtedy zjawisko tzw. kolapsu hydrofobowego, gdzie odwrĂłcona
faza na kolumnie zawija sie sama w sobie i traci zdolnoĹÄ sorpcji i podziaĹu.
Na klasycznych kolumnach typu C18 nie wolno myÄ samÄ
wodÄ
. Lepiej nie uzywaÄ
gradientu poniĹźej 10% acetonitrylu. No chyba ze masz specjalna kolumne
przystosowana do 100% wody; nazwa Twojej kolumny (ODS-AQ) sugeruje, ze moĹźe
sie nadaje (to AQ w nazwie, ale sprawdz to). Podobnie proponuje nie uzywac
samego acetonitrylu, tylko gdzie 90% z woda (zapobiega to wytracaniu sie soli
nieorganicznych). Ja zazwyczaj robie nastrzyki w gradiencie (np od 20%
acetonitrylu do 80% acetonitrylu w wodzie), a po nastrzyku pĹukam 90%
acetonitrylem. Dalej stabilizuje na poczatkowy gradient (np. 20% MeCN) i od
lat nie mam problemĂłw. Jesli stabilizujesz kolumne przed nastrzykiem na 100%
wody to jest wg. mnie przyczyna Twoich problemĂłw.
Powodzenia!
-- Witek Mozga http://www.trimen.pl/witek/Received on Thu Oct 25 12:53:28 2007
To archiwum zostało wygenerowane przez hypermail 2.1.8 : Thu 25 Oct 2007 - 13:12:01 MET DST